РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ ПО РАЗРАБОТКЕ ВЫСОКООЧИЩЕННОЙ ГИАЛУРОНАТ-ЭНДО-β-N-АЦЕТИЛГЕКСОЗАМИНИДАЗЫ В КАЧЕСТВЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ ДЛЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА : УДК 616-092.4:615.012:577.15.01

Александра Михайловна Швецова; Константин Игоревич Ершов; Максим Александрович Королев; Павел Геннадьевич Мадонов

doi:10.31684/25418475-2023-4-68

Авторы

Александра Михайловна Швецова Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск https://orcid.org/0009-0002-7735-6032 Email: aleksa-2904@mail.ru
Константин Игоревич Ершов Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск https://orcid.org/0000-0003-4139-036X Email: aleksa-2904@mail.ru
Максим Александрович Королев Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск https://orcid.org/0000-0002-0471-652X Email: kormax@bk.ru
Павел Геннадьевич Мадонов Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск https://orcid.org/0000-0002-1093-8938 Email: pmadonov@yandex.ru

DOI:

https://doi.org/10.31684/25418475-2023-4-68

Ключевые слова:

гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидаза, фармацевтическая субстанция, разработка технологии

Аннотация

Ферментные препараты, среди которых и гиалуронидаза, нашли широкое применение в медицинской практике. Большинство присутствующих на фармацевтическом рынке средств с данным действующим веществом производятся в основном из тестикулярной гиалуронидазы, сырьем для которой выступают семенники крупного рогатого скота. Технологии получения энзимного препарата достаточно известны и многообразны. Но между тем, создание иного способа позволит получить высокоочищенную гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидазу с высокой удельной ферментативной активностью. Цель: разработать технологию и получить по ней лабораторную партию высокоочищенной фармацевтической субстанции гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидазы. Материал и методы. В экспериментальном исследовании были взяты препараты экстрактов бычьих семенников для получения высокоочищенной гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидазы. На первом этапе произведено изучение белкового спектра вытяжки семенников, дробное высаливание белков, фракционированы вещества различной химической природы методами хроматографии. На втором этапе проведена разработка способа получения фармацевтической субстанции гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидазы методами, описанными далее в работе. Результаты. На основании результатов, полученных в ходе экспериментального исследования, в качестве исходной субстанции неочищенной гиалуронидазы для дальнейших исследований был выбран П-II – препарат вытяжки бычьих семенников, производства ООО «Самсон-Мед» (г. Санкт-Петербург). Наиболее оптимальной является схема очистки, которая включает в качестве основного метода аффинную хроматографию на гепарин-сефарозе с использованием аффинной элюции раствором гепарина в буфере с концентрацией 3 мг/мл. Заключение. В результате проведенного экспериментального исследования представлена оптимальная схема технологии получения фармацевтической субстанции ГЭБНА с высокой ферментативной суммарной активностью 289 ЕД, и получена лабораторная партия высокоочищенной гиалуронат-эндо-β-N-ацетилгексозаминидазы.

Скачивания

Данные скачивания пока недоступны.

Информация об авторах

Александра Михайловна Швецова,
Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск

младший научный сотрудник, НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ИЦиГ Со РАН, г. Новосибирск.
E-mail: aleksa-2904@mail.ru
https://orcid.org/0009-0002-7735-6032

Константин Игоревич Ершов,
Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск

к. б. н., доцент, НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ИЦиГ Со РАН; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск.
E-mail: aleksa-2904@mail.ru
https://orcid.org/0000-0003-4139-036X

Максим Александрович Королев,
Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск

д. м. н., НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ИЦиГ Со РАН, г. Новосибирск.
E-mail: kormax@bk.ru
https://orcid.org/0000-0002-0471-652X

Павел Геннадьевич Мадонов,
Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск

д. м. н., доцент, НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ИЦиГ Со РАН; Новосибирский государственный медицинский университет, г. Новосибирск.
Email: pmadonov@yandex.ru
https://orcid.org/0000-0002-1093-8938

Библиографические ссылки

Барсуков А.К., Кожевникова О.В., Хохрякова А.В. Выделение и очистка бычьей тестикулярной гиалуронидазы. Прикладная биохимия и микробиология. 2003; 39(6): 625.

Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. Москва, 2022:1120.

Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В. и др. Влияние трансплантации мононуклеаров периферической крови, полученных с использованием гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и гиалуронидазы, на регенерацию кроветворной ткани при миелосупрессии. Клеточные технологии в биологии и медицине. 2009; 3:136-142.

Дыгай А.М., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В. Регенеративная медицина: в поисках «эликсира жизни». Наука из первых рук. 2013; 3(51): 24-31.

Дыгай А.М., Першина О.В., Крупин В.А., Ермолаева Л.А., Ермакова Н.Н., Шилова М.А., Мадонов П.Г., Киншт Д.Н., Скурихин Е.Г. Изучение антифибротической активности модифицированной и нативной гиалуронидазы при пневмофиброзе. Сибирский научный медицинский журнал. 2017; 37(4): 5–10.

Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680-5. https://doi.org/10.1038/227680a0

Guntenhöner M.W., Pogrel M.A., Stern R. A substrate-gel assay for hyaluronidase activity. Matrix. 1992; 12(5): 388-96. https://doi.org/10.1016/S0934-8832(11)80035-1

Скоупс Р. Методы очистки белков. Москва, 1985:385.

Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. Москва, 1991:544.

Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976; 72: 248-254. https://doi.org/10.1006/abio.1976.9999. PMID: 942051.

Lalancette C., Dorval V., Leblanc V., Leclerc P. Characterization of an 80-kilodalton bull sperm protein identified as PH-20. Biol Reprod. 2001; 65(2): 628-36. https://doi.org/10.1095/biolreprod65.2.628. PMID: 11466235.

Morin G., Lalancette C., Sullivan R., Leclerc P. Identification of the bull sperm p80 protein as a PH-20 ortholog and its modification during the epididymal transit. Mol Reprod Dev. 2005; 71(4): 523-34. https://doi.org/10.1002/mrd.20308. PMID: 15892045

Методика измерения гиалуронидазной активности. ЛСР-009264/09-171109 на субстанцию «Лидаза» ООО «Самсон-Мед».

http://www.uniprot.org/